» Testkits/Assays
Das Kolonkarzinom ist weltweit die dritthäufigste Krebsart mit über 600.000 neu diagnostizierten Fällen. Er entwickelt sich aus makroskopisch sichtbaren und lange Jahre bestehenden Praekanzerosen. Während Patienten mit kolorektalen Tumoren fortgeschrittenen Stadiums eine sehr schlechte Prognose haben, können Tumoren, die sehr früh erkannt werden normalerweise noch vor der Metastasierung chirurgisch entfernt werden.
Das Ziel ist es demnach, mit diagnostischen Mitteln diese Präkanzerosen zu entdecken. Die vorgestellten Assays bieten einen Schritt in diese Richtung.
Diese Tests sind spezifische und sensitive immunologische Methoden, die leicht durchführbar sind und klinisch aussagekräftige Ergebnisse liefern. Sie haben den Vorteil, dass keine Diät eingehalten werden muss. Immunologische Methoden sind unabhängig von der Diät, da sie mit hochspezifischen Antikörpern arbeiten. Es haben sich besonders immunologische Testverfahren etabliert, die spezifisch das Hämoglobin im Stuhl erkennen. Dadurch werden die Sensitivität und die Spezifität deutlich heraufgesetzt. Ein Nachteil ist der bakterielle Abbau von Hämoglobin im Darm, wodurch es zu falsch negativen Werten kommen kann. Gerade bei Adenomen bzw. Karzinomen im Cecum und aufsteigenden Kolon kann es durch die lange Darmpassage zu einem Abbau des Hämoglobins kommen. Stabiler hingegen ist ein Komplex aus Hämoglobin und Haptoglobin (Hb-Hp). Dies mag das bessere Erkennen von Adenomen und von Karzinomen auch im Anfangsteil des Kolons erklären.
Während der Hämoglobin Haptoglobin Test mehr Adenome erkennt, ist der Hämoglobin Test sensitiver und spezifischer in Bezug auf Kolonkarzinome.
Durch die Kombination beider Teste kann das Diagnostische Netz zur Erkennung von Kolonkarzinomen und Adenomen enger geknüpft werden.
| Bezeichnung | Medium | Methode | Tests | Art. Nr. |
|---|---|---|---|---|
| Hämoglobin ELISA | Stuhl | ELISA | 96 | 01-10.010 |
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Bei dem Hämoglobin ELISA werden zwei polyklonale Antikörper verwendet, die hochspezifisch gegen humanes Hämoglobin sind. Eine Mikrotiterplatte wurde mit einem polyklonalen Kaninchen-Antikörper, der gegen Hämoglobin gerichtet ist, beschichtet. In die "Wells" werden Standards, Kontrollen und zu bestimmende Proben pipettiert. Nach einem Inkubations- und Waschschritt wird ein mit HRP (Horseradish-Peroxidase) markierter polyklonaler Antikörper zugegeben. Nach einem weiteren Inkubations- und Waschschritt wird das Substrat (Tetramethylbenzidin) für die Enzymreaktion zugegeben. Die Farbreaktion wird durch Zugabe von 0,5 M Schwefelsäure (Stopplösung) gestoppt und mit einem Photometer bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen. Die Konzentration von Hämoglobin ist verhältnisgleich mit der Intensität der Färbung. Anhand der mitgemessenen Standardkurve werden die Konzentrationen der Proben ermittelt. |
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| Hämoglobin 1-Punkt-Kalibration | Stuhl | ELISA | 96 | 01-12.010 |
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Bei dem Hämoglobin ELISA werden zwei polyklonale Antikörper verwendet, die hochspezifisch gegen humanes Hämoglobin sind. Eine Mikrotiterplatte wurde mit einem polyklonalem Kaninchen- Antikörper der gegen Hämoglobin gerichtet ist, beschichtet. In die "Wells" werden Standards, Kontrollen und zu bestimmende Proben pipettiert. Nach einem Inkubations- und Waschschritt wird ein mit HRP (Horseradish-Peroxidase) markierter polyklonaler Antikörper zugegeben. Nach einem weiteren Inkubations- und Waschschritt wird das Substrat (Tetramethylbenzidin) für die Enzymreaktion zugegeben. Die Farbreaktion wird durch Zugabe von 0,5 M Schwefelsäure (Stopplösung) gestoppt und mit einem Photometer bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen. Die Konzentration von Hämoglobin ist verhältnisgleich mit der Intensität der Färbung. Anhand des mitgemessenen Kalibrators werden die Konzentrationen der Proben ermittelt.
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| Hämoglobin EIA | Stuhl | EIA | 96 | 01-11.010 |
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Proben, Kontrollen, Standards und Konjugat (markiertes Hämoglobin) werden zusammen mit dem Antikörper (Anti- Hämoglobin), der an die Mikrotiterplatte gebunden ist inkubiert. Dabei konkurrieren die markierten Antigene (Konjugat) mit den Antigenen aus der Probe um die Bindungsstellen des Antikörpers an der Platte. Nicht gebundene Proteine werden mit dem anschließenden Waschschritt entfernt Nun wird das Substrat (Tetramethylbenzidin) für die Enzymreaktion zugegeben. Die Farbreaktion wird durch Zugabe von 0,5 M Schwefelsäure (Stopplösung) gestoppt und mit einem Photometer bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen. Die Konzentration von Hämoglobin ist umgekehrt proportional mit der Intensität der Färbung. Anhand der mitgemessenen Standardkurve werden die Konzentrationen der Proben ermittelt.
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| Hämoglobin LIA | Stuhl | LIA | 100 | 01-01.010 |
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Proben, Kontrollen, Standards und Tracer (markiertes Hämoglobin) werden zusammen mit dem Antikörper (Anti- Hämoglobin), der an die Polystyrolkugel gebunden ist inkubiert. Dabei konkurrieren die markierten Antigene (Tracer) mit den Antigenen aus der Probe um die Bindungsstellen des Antikörpers an der Kugel. Nicht gebundene Proteine werden mit dem anschließenden Waschschritt entfernt. Die Chemilumineszenz des Acridinium wird ausgelöst durch die Zugabe von 0,5% H2O2 in 0,1 N HNO3 und 0,25 N NaOH direkt in die Messkammer. In einem Luminometer werden die Signale gemessen. Nun kann die Konzentration anhand einer Standardkurve bestimmt werden.
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| Hämoglobin-Haptoglobin-Komplex ELISA | Stuhl | ELISA | 96 | 01-10.011 |
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Bei dem Hämoglobin-Haptoglobin-Komplex ELISA wird ein polyklonaler Antikörper gegen Haptoglobin und zwei monoklonale Antikörper, die hochspezifisch gegen humanes Hämoglobin sind, eingesetzt. Eine Mikrotiterplatte wurde mit einem polyklonalen Kaninchen-Antiköper der gegen Haptoglobin gerichtet ist, beschichtet. In die "Wells" werden Standards, Kontrollen und zu bestimmende Proben pipettiert. Nach einem Inkubations- und Waschschritt wird ein mit HRP (Horseradish-Peroxidase) markierter monoklonale Antikörper zugegeben. Nach einem weiteren Inkubations- und Waschschritt wird das Substrat (Tetramethylbenzidin) für die Enzymreaktion zugegeben. Die Farbreaktion wird durch Zugabe von 0,5 M Schwefelsäure (Stopplösung) gestoppt und mit einem Photometer bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen. Die Konzentration vom Hämoglobin-Haptoglobin-Komplex ist verhältnisgleich mit der Intensität der Färbung. Anhand der mitgemessenen Standardkurve werden die Konzentrationen der Proben ermittelt. |
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| Hämoglobin-Haptoglobin-Komplex (1-Punkt.) | Stuhl | ELISA | 96 | 01-12.011 |
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Bei dem Hämoglobin-Haptoglobin-Komplex ELISA wird ein polyklonaler Antikörper gegen Haptoglobin und zwei monoklonale Antikörper, die hochspezifisch gegen humanes Hämoglobin sind, eingesetzt. Eine Mikrotiterplatte wurde mit einem polyklonalen Kaninchen- Antiköper der gegen Haptoglobin gerichtet ist, beschichtet. In die "Wells" werden Standards, Kontrollen und zu bestimmende Proben pipettiert. Nach einem Inkubations- und Waschschritt wird ein mit HRP (Horseradish-Peroxidase) markierter monoklonaler Antikörper zugegeben. Nach einem weiteren Inkubations- und Waschschritt wird das Substrat (Tetramethylbenzidin) für die Enzymreaktion zugegeben. Die Farbreaktion wird durch Zugabe von 0,5 M Schwefelsäure (Stopplösung) gestoppt und mit einem Photometer bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen. Die Konzentration vom Hämoglobin-Haptoglobin-Komplex ist verhältnisgleich mit der Intensität der Färbung. Anhand des mit gemessenen Kalibrators werden die Konzentrationen der Proben berechnet. |
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| Hämoglobin-Haptoglobin-Komplex ILMA | Stuhl | ILMA | 100 | 01-02.011 |
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Bei dem Hämoglobin-Haptoglobin-Komplex ILMA werden ein polyklonale Antikörper verwendet, der hochspezifisch gegen humanes Haptoglobin ist. Zwei monklonale Antikörper sind spezifisch für Hämoglobin. Eine Polystyrolkugel wurde mit polyklonalen Kaninchen- Antikörper die gegen Haptglobin beschichtet. In Röhrchen werden Kugel, Standards, Kontrollen und zu bestimmende Proben pipettiert. Nach einem Inkubations- und Waschschritt wird ein mit Acridiniumester markierter monoklonaler Antikörper zugegeben. Nach einem weiteren Inkubations- und Waschschritt werden nicht gebundene Proteine entfernt. Die Chemilumineszenz des Acridiniumesters wird ausgelöst durch die Zugabe von 0,5% H2O2 in 0,1 N HNO3 und 0,25 N NaOH direkt in die Messkammer. In einem Luminometer werden die Signale gemessen. Nun kann die Konzentration anhand einer Standardkurve bestimmt werden |
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| Haptoglobin ELISA | Stuhl | ELISA | 96 | 01-10.012 |
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Bei dem Haptoglobin ELISA werden zwei polyklonale Antikörper verwendet, die hochspezifisch gegen humanes Haptoglobin sind. Eine Mikrotiterplatte wurde mit einem polyklonalem Kaninchen- Antikörper der gegen Haptoglobin gerichtet ist, beschichtet. In die "Wells" werden Standards, Kontrollen und zu bestimmende Proben pipettiert. Nach einem Inkubations- und Waschschritt wird ein mit HRP (Horseradish-Peroxidase) markierter polyklonaler Antikörper zugegeben. Nach einem weiteren Inkubations- und Waschschritt wird das Substrat (Tetramethylbenzidin) für die Enzymreaktion zugegeben. Die Farbreaktion wird durch Zugabe von 0,5 M Schwefelsäure (Stopplösung) gestoppt und mit einem Photometer bei einer Wellenlänge von 450 nm gemessen. Die Konzentration von Haptoglobin ist verhältnisgleich mit der Intensität der Färbung. Anhand der mitgemessenen Standardkurve werden die Konzentrationen der Proben ermittelt.
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